1.연구 결과
1) Regulation of ADAM33 mRNA expression by cytokines.
MRC-5 fibroblast를 IL-1, TGF-b, IL-4, IL-13, INF-r 의 사이토카인을 각각 10ng/ml로 처리 후, lysate로 RT-PCR을 시행하였다. 기대와는 달리 TGF-beta는 별다른 변화가없었으나, IL-4, IL-13, I ...
1.연구 결과
1) Regulation of ADAM33 mRNA expression by cytokines.
MRC-5 fibroblast를 IL-1, TGF-b, IL-4, IL-13, INF-r 의 사이토카인을 각각 10ng/ml로 처리 후, lysate로 RT-PCR을 시행하였다. 기대와는 달리 TGF-beta는 별다른 변화가없었으나, IL-4, IL-13, IFN-r 처리시 catalytic domain에서 alternative splicing form이 나타났으며,IL-4 로 처리한 경우에 가장 강하게 나타났다.
2) RPA( Ribonucleotide protection assay)
alternative splicing form의 양적인 차이를 확인하기위래 RPA를 IL-4, IL-13, IFN-r처리 군에서 시행했으며,
PCR과 동일한 IL-4, IL-13처리군에서 강한 alternative splicing form을 확인할 수 있었다.
3)Immunoblot for ADAM33 catalytic domain
protein expression의 차이를 확인하기위해 catalytic domain에 대한 Ab를 제작하여 BALF와 lysate에서western blot을 시행하였고, IL-13 처리군에서 ADAM 33의 발현이 가장 강하게, IFN-r의 발현은 약함을 알 수 잇었다.
결과 : IPF human lung fibroblast에서 ADAM33(catalytic domain)의 alternative splicing form이 profibrotic cytokine에 따라 달리 발현됨을 알 수 있었고, 이는 soluble protein(BALF) expression에서도 볼 수 있었다.
2.활용방안: 이런 ADAM33 catalytic domain의 activity의 차이가 profibrotic cytokine에의해 조절되어 이로인해 폐섬유화를 촉진한다면, ADAM33 catalytic domain에 대한 antibody or blocking peptide를 개발하여 폐섬유화의 치료에 응용할 수 있을것으로 사료된다.