PICOT 유전자가 심장 발육과정에 미치는 영향을 알아보고자, PICOT 유전자 결손 생쥐 배자를 대상으로 심장과 큰 혈관을 중심으로 형태발생(morphogenesis)을 조사하였다. 즉, PICOT 유전자 결손 생쥐 배자에서 표본을 수집하였고, 고정된 표본을 단계별 에탄올로 탈수 처 ...

PICOT 유전자가 심장 발육과정에 미치는 영향을 알아보고자, PICOT 유전자 결손 생쥐 배자를 대상으로 심장과 큰 혈관을 중심으로 형태발생(morphogenesis)을 조사하였다. 즉, PICOT 유전자 결손 생쥐 배자에서 표본을 수집하였고, 고정된 표본을 단계별 에탄올로 탈수 처리한 다음 JB4 resin에 포매한 후, 자동화 회전식 마이크로톰을 이용하여 연속 절단하였다. 매 절단면에 대한 영상을 GFP filter set (excitation filter 470/40; emission filter 525/50)가 설치된 카메라를 이용하여 캡쳐하고 저장하는 등, 유전자 활성의 3D 분석을 위한 준비 실험을 시행하였다.
PICOT 유전자 결손 생쥐 배자에서 지금까지 획득한 digital image series를 volume data set로 변환하고 처리한 다음, state-of-the-art image processing과 3D reconstruction software를 이용하여 일부 분석하였다. 즉, image는 Adobe Photoshop과 EmVis (M. Knapp이 개발, Technical University of Vienna) 소프트웨어 등을 이용하여 처리한 다음, 3D image 작업 및 분석은 Amira 소프트웨어를 이용하여 수동 작업으로 처리하고, surface- 와 volume-rendered 3D model은 EmVis와 Volocity (Improvision)를 이용하여 획득하였다.

Rapid and precise phenotyping analysis of individual mutant or transgenic embryos is essential for characterizing the genetic and epigenetic factors regulating embryogenesis. We describe a technique suitable for routine three-dimensional (3-D) analysi ...

Rapid and precise phenotyping analysis of individual mutant or transgenic embryos is essential for characterizing the genetic and epigenetic factors regulating embryogenesis. We describe a technique suitable for routine three-dimensional (3-D) analysis of mouse embryos that is based on high resolution episcopic microscopic (HREM) images captured during serial sectioning of resin-embedded specimens. We have used this procedure to describe the cardiac phenotype and associated blood vessels of PICOT knock out mice. The consistency of the images and their precise alignment are ideally suited for 3-D analysis using video animations, virtual resectioning or commercial 3-D reconstruction software packages. HREM provides a simple and powerful tool for analyzing embryos and organ morphology in normal and transgenic embryos.

Rapid and precise phenotyping analysis of individual mutant or transgenic embryos is essential for characterizing the genetic and epigenetic factors regulating embryogenesis. We describe a technique suitable for routine three-dimensional (3-D) analysi ...

Rapid and precise phenotyping analysis of individual mutant or transgenic embryos is essential for characterizing the genetic and epigenetic factors regulating embryogenesis. We describe a technique suitable for routine three-dimensional (3-D) analysis of mouse embryos that is based on high resolution episcopic microscopic (HREM) images captured during serial sectioning of resin-embedded specimens. We have used this procedure to describe the cardiac phenotype and associated blood vessels of PICOT knock out mice. The consistency of the images and their precise alignment are ideally suited for 3-D analysis using video animations, virtual resectioning or commercial 3-D reconstruction software packages. HREM provides a simple and powerful tool for analyzing embryos and organ morphology in normal and transgenic embryos.

(1) Hop 및 PICOT knockout/transgenic mice에서 태생기 및 생후 발달 단계별 표본 수집 및 고정
(2) 유전자 활성의 3D 분석 기법 습득
(3) Hop 및 PICOT knockout/transgenic 표본 절단 및 image capture
(4) Image processing 및 3D reconstruction
(5) 조직 및 기 ...

(1) Hop 및 PICOT knockout/transgenic mice에서 태생기 및 생후 발달 단계별 표본 수집 및 고정
(2) 유전자 활성의 3D 분석 기법 습득
(3) Hop 및 PICOT knockout/transgenic 표본 절단 및 image capture
(4) Image processing 및 3D reconstruction
(5) 조직 및 기관 수준에서 HREM을 이용한 3D 기법 개발 (추후 공동연구 가능)

이전까지 국내에서 확보되거나 활용되지 못한 기술로서, 이번 해외 파견 연구를 통해 습득한 "유전자 활성의 3D 분석 기법"을 이용하여 본 대학의 공동 연구진이 이미 확립한 몇 가지 transgenic 또는 knockout animal에서 유전자의 활성 및 표현형을 초기 발생 단계에서부터 생후 발육 과정까지 3D analysis를 통해 조사하고자 한다.