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형질전환 생쥐들에 있어서 혈관신생에 의한 Mena/VASP 단백질 및 AMPK/VASP 기능의 특성 규명
Reports NRF is supported by Research Projects( 형질전환 생쥐들에 있어서 혈관신생에 의한 Mena/VASP 단백질 및 AMPK/VASP 기능의 특성 규명 | 2008 Year 신청요강 다운로드 PDF다운로드 | 김영민(한남대학교) ) data is submitted to the NRF Project Results
Researcher who has been awarded a research grant by Humanities and Social Studies Support Program of NRF has to submit an end product within 6 months(* depend on the form of business)
  • Researchers have entered the information directly to the NRF of Korea research support system
Project Number C00061
Year(selected) 2008 Year
the present condition of Project 종료
State of proposition 재단승인
Completion Date 2009년 08월 07일
Year type 결과보고
Year(final report) 2009년
Research Summary
  • Korean
  • 본 연구는 신생혈관형성에 있어서 vasodilatator stimulierte phosphoprotein (VASP)의 기능을 알아보기 위한 목적으로, 정상인 WT-생쥐(VASP-wild type)와 KO-생쥐(VASP-knockout, VASP-/-)에서 ex vivo 및 in vivo 실험을 통하여 수행되었다.
    정상인 WT-생쥐와 KO-생쥐에 B16F10 세포를 피하 주사한 후, 6, 8, 10. 12. 14일 째에 WT-생쥐와 KO-생쥐의 종양을 각각 분리하여, 이들의 종양의 성장 속도와 크기 등을 비교 분석한 결과, KO-생쥐의 경우, WT-생쥐에서보다 종양의 성장이 느린 것을 확인하였는데, 이는 VASP 유전자가 결여되어 신생혈관형성이 억제되었기 때문인 것으로 보인다.
    각 날짜별로 분리한 종양조직을 통하여 조직학적 실험을 실시한 결과, WT-생쥐의 경우, 제대로 성장한 커다란 크기의 종양세포가 관찰되었으나, KO-생쥐의 경우에는 VASP 유전자가 결여된 관계로 종양세포의 성장이 억제된 것을 관찰할 수 있었다. 이와 같은 결과를 통하여, VASP가 암의 신생혈관형성에 있어서 직접적으로 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.
    B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14일 째의 종양 조직에서 단백질을 추출하여 VASP, Mena, Evl 단백질의 Western Blotting 실험 결과, 이들 Ena-VASP family에 있어서 WT-생쥐와 KO-생쥐 사이에서의 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았으며, 이는 향후 실험을 통하여 밝혀야할 과제인 것으로 보인다.
    WT-생쥐와 KO-생쥐의 mRNA 발현에 차이점이 나타나는지를 확인하기 위하여, B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14 일째의 종양 조직으로부터 mRNA를 추출하여 RT-PCR을 수행한 결과, VASP, Mena, Evl 유전자의 mRNA 사이에서 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았으며, 이는 향후 real tome PCR 실험을 통한 정량적 분석을 통하여 밝혀야 할 과제로 보인다.
  • English
  • This research was performed to investigate the function of vasodilatator stimulierte phosphoprotein (VASP) in the angiogenesis, using the normal WT-mice (VASP-wild type) and KO-mouse (VASP-knockout, VASP-/-) in ex vivo and in vivo experiments.
    B16F10 cells were injected in the KO-mice and normal WT-mice, subcutaneously. The tumors were separated after 6, 8, 10, 12, and 14 days, and the growth rate and size of tumors are analyzed. It was confirmed that the growth of tumors in KO-mice is slower than WT-mice. It is considered that the angiogenesis was suppressed because of the lack of VASP-genes in the KO-mice.
    By the immunohistochemical staining using tumor tissue, it was observed that the growth of the tumor cells is suppressed in the KO-mice. Through these results, it seems that the VASP is directly an important role for the angiogenesis.
    The tumor tissue was extracted in 8, 10, 12 and 14 days after injection of B16F10 cells. It was confirmed the expression of the Ena-VASP family in WT-mice and the KO-mice through Western Blotting. The difference was not observed, and the next task will be to go out through the experiment.
    In order to determine the differences of mRNA expression, the RT-PCR experiments were performed after injection of B16F10 cells. The difference of the mRNA expression of VASP, Mena, and Evl gene was not clear. It should be clarified through quantitative analysis through real time PCR experiments.
Research result report
  • Abstract
  • 본 연구는 신생혈관형성에 있어서 vasodilatator stimulierte phosphoprotein (VASP)의 기능을 알아보기 위한 목적으로, 정상인 WT-생쥐(VASP-wild type)와 KO-생쥐(VASP-knockout, VASP-/-)에서 ex vivo 및 in vivo 실험을 통하여 수행되었다.
    정상인 WT-생쥐와 KO-생쥐에 B16F10 세포를 피하 주사한 후, 6, 8, 10. 12. 14일 째에 WT-생쥐와 KO-생쥐의 종양을 각각 분리하여, 이들의 종양의 성장 속도와 크기 등을 비교 분석한 결과, KO-생쥐의 경우, WT-생쥐에서보다 종양의 성장이 느린 것을 확인하였는데, 이는 VASP 유전자가 결여되어 신생혈관형성이 억제되었기 때문인 것으로 보인다.
    각 날짜별로 분리한 종양조직을 통하여 조직학적 실험을 실시한 결과, WT-생쥐의 경우, 제대로 성장한 커다란 크기의 종양세포가 관찰되었으나, KO-생쥐의 경우에는 VASP 유전자가 결여된 관계로 종양세포의 성장이 억제된 것을 관찰할 수 있었다. 이와 같은 결과를 통하여, VASP가 암의 신생혈관형성에 있어서 직접적으로 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.
    B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14일 째의 종양 조직에서 단백질을 추출하여 VASP, Mena, Evl 단백질의 Western Blotting 실험 결과, 이들 Ena-VASP family에 있어서 WT-생쥐와 KO-생쥐 사이에서의 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았으며, 이는 향후 실험을 통하여 밝혀야할 과제인 것으로 보인다.
    WT-생쥐와 KO-생쥐의 mRNA 발현에 차이점이 나타나는지를 확인하기 위하여, B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14 일째의 종양 조직으로부터 mRNA를 추출하여 RT-PCR을 수행한 결과, VASP, Mena, Evl 유전자의 mRNA 사이에서 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았으며, 이는 향후 real tome PCR 실험을 통한 정량적 분석을 통하여 밝혀야 할 과제로 보인다.
  • Research result and Utilization method
  • 1) 연구결과
    - WT-생쥐와 KO-생쥐에서 종양(tumor)의 성장 분석 : 정상인 WT-생쥐와 VASP가 결핍된 KO-생쥐(VASP-/-)에 B16F10 세포를 주사한 후에, 8, 10. 12. 14일 째의 종양을 각각 분리하여, 이들 종양의 성장 속도와 크기 등을 비교 분석함으로써, 암의 신생혈관형성에서 VASP 단백질의 기능을 분석하였다. 총 100 마리 이상의 생쥐가 사용되었고, 배양한 B16F10 세포를 오른쪽 등쪽 아래에 2.5x106 cells/ml의 양으로 피하 주사하였다. WT-생쥐와 KO-생쥐에서 성장한 종양의 무게를 비교한 결과, VASP가 KO-생쥐의 경우에 WT-생쥐에서보다 종양의 성장이 느린 것을 확인하였다. 이와 같은 이유는 VASP 유전자가 결여(VASP-/-)되어 신생혈관형성이 억제되었기 때문인 것으로 보인다.
    - Immunohistochemical staining : 각 날짜별로 분리한 종양조직을 0.5% 포름알데히드에 저장한 후에 조직학적 실험을 실시하였다. WT-생쥐의 경우, 제대로 성장한 커다란 크기의 종양세포가 관찰되었으나, KO-생쥐의 경우에는 VASP 유전자가 결여된 관계로 종양세포의 성장이 억제된 것을 관찰할 수 있었다. 이러한 조직학적 실험결과를 통하여, VASP가 암의 신생혈관형성에 있어서 직접적으로 중요한 역할을 하는 것으로 보인다.
    - Ena-VASP family의 Western blot 분석
    B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14일 째의 종양 조직에서 단백질을 추출하여, Western Blotting 실험을 실시하였다. Ena-VASP family인 VASP, Mena, Evl에 있어서 WT-생쥐와 KO-생쥐 사이에서의 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았는데, 이는 향후 실험을 통하여 밝혀야할 과제인 것으로 보인다.

    - Ena-VASP family의 RT-PCR 분석
    B16F10 세포를 주사한 지 8, 10, 12, 14 일째의 종양 조직으로부터 mRNA를 추출한 후, RT-PCR을 수행하였다. 실험 결과, VASP, Mena, Evl 유전자에 있어서 WT-생쥐와 KO-생쥐 사이에서의 뚜렷한 발현의 차이는 관찰되지 않았고, 이는 향후 real time PCR 실험을 통한 정량적 분석을 통하여 밝혀야할 과제이다.

    2) 활용 방안
    이상과 같이 VASP가 암세포의 신생혈관형성(angiogenesis)에 관여한다는 연구내용을 통하여 AMPK, COX-2, LKB1 등 VASP 관련 단백질에 관한 연구를 수행함으로써, 항암기작을 밝힐 수 있는 중요한 기초자료로써 활용이 가능할 것으로 보인다.
  • Index terms
  • Angiogenesis, Ena-VASP family, VASP-KO 생쥐, VASP-WT 생쥐, B16F10 cells, tumor growth
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