최근 생체의 항상성조절과 뇌에서 합성되는 angiotensin peptide 의 관계에 대한 보고가 증가하고 있다. 그러나, 어떻게 gene expression 이 조절되는지는 알려져 있지 않다. 본 연구자는 호메오 도메인을 포함하는 전사조절인자인 TTF-1에 의한 angiotensinogen-angiote ...

최근 생체의 항상성조절과 뇌에서 합성되는 angiotensin peptide 의 관계에 대한 보고가 증가하고 있다. 그러나, 어떻게 gene expression 이 조절되는지는 알려져 있지 않다. 본 연구자는 호메오 도메인을 포함하는 전사조절인자인 TTF-1에 의한 angiotensinogen-angiotensin precursor-의 합성 및 조절장소 subfornical organ에서의 조절을 밝히고 나아가서 구갈성 조절과 일주기성 관계를 확인하였다. 먼저, water-deprivation 상태에서는 TTF-1과 angiotensinogen (AoGen) 의 발현이 증가하였다. 또, AoGen 의 promoter 부위에는 TTF-1의 binding motif 가 있음을 확인하였고, promoter assay를 수행한 결과 강한 promoter activation 효과가 있었다. 그리고, 뇌에서 TTF-1의 합성을 억제하자 흰쥐의 물섭취량이 줄어 들었을 뿐만 아니라, 소변의 양은 증가하였다. 이러한 결과는 TTF-1이 AoGen 합성을 조절하여 생체의 수분 항상성을 조절함을 보여준다. 그리고, 이러한 수분 항상성은 일주기성을 가지며, 생체시계부위로 알려진 시상하부 지역의 SCN과 연관성을 가짐을 확인하였다. 먼저, circadian oscillator로 잘 알려진 Period 단백질과 TTF-1의 관계를 mammalian two hybrid assay 와 Fluorescence resonance energy transfer (FRET)를 이용해서 두 분자가 서로 결합함을 확인하였다. 이것은 TTF-1은 SCN에서 period 단백질과 결합을 통하여 AoGen의 일주기성을 조절함을 의미한다. 결과적으로 TTF-1은 흰쥐 뇌에서 수분 항상성 조절의 중요인자인 AoGen의 합성을 조절하고, 이것은 시간조절 유전자와의 결합에 의해 일주기적 패턴을 보인다. 결과적으로 homeo-domain containing transcription factor, TTF-1이 angiotensinogen의 gene expression을 조절함으로 수분항상성을 조절하며, 이러한 조절은 생체 시계 조절인자인 Period와 함께 작용하여 일주기적 패턴을 가지는 것으로 확인된다.

We recently found that TTF-1, a homeodomain-containing transcription factor essential for the development of the fetal diencephalon, is postnatally expressed in discrete areas of the hypothalamus where it regulates the transcription of certain neuroho ...

We recently found that TTF-1, a homeodomain-containing transcription factor essential for the development of the fetal diencephalon, is postnatally expressed in discrete areas of the hypothalamus where it regulates the transcription of certain neurohormones involved in the control of reproductive function. We now report that the subfornical organ, an important site of angiotensinogen synthesis, is a unique extrahypothalamic site of TTF-1 expression. Double in situ hybridization histochemistry demonstrated the presence of TTF-1 mRNA in angiotensinogen-producing cells of the rat subfornical organ. RNase protection assays showed that TTF-1 and angiotensinogen mRNA levels are simultaneously increased in the subfornical organ by water-deprivation. The angiotensinogen promoter contains seven presumptive TTF-1 binding motifs, four of which are recognized by the TTF-1 homeodomain. In the C6 glioma cell-line, TTF-1 transactivates the angiotensinogen promoter in a dose-dependent manner. This transactivation is abolished by deletion of the TTF-1 binding motif at 125. Intracranial administration of an antisense TTF-1 oligodeoxynucleotide decreased both angiotensinogen mRNA and TTF-1 protein content in the subfornical organ, and dramatically reduced the animal's water intake while increasing urine excretion. Moreover, plasma arginine vasopressin content was significantly decreased by the same treatment. These results demonstrate a novel role for TTF-1 in the regulation of body-fluid homeostasis, exerted via the transactivational control of angiotensinogen synthesis in the subfornical organ
And, fluorescence in situ hybridization study showed that TTF-1 was predominantly expressed in the rat suprachiasmatic nucleus (SCN) and colocalized with Period (Per), a circadian feedback loop controller. Interaction between Per and TTF-1 was demonstrated by immunoprecipitation assay. In addition, mammalian two hybrid assay and Fluorescence resonance energy transfer (FRET) were reveal that TTF-1 can interact with Per1 and Per2. we recently found that TTF-1 regulates brain angiotensinogen (AoGen) gene expression. Now I report that AoGen transcriptional activities were regulated by cotransfection of TTF-1/Per1 or TTF-1/Per2. Expression vectors for Per proteins and TTF-1 additively transactivate AoGen promoter activity during transient transfection into the BAS 8.1 cells. In vitro rhythm of AoGen transcription determined by secretary alkaline phosphatase (SEAP) reporter system. AoGen-SEAP promoter has a circadian rhythm under transient transfection of TTF-1 expression vector. These results suggest that TTF-1 plays a role in the circadian rhythm regulation of the AoGen gene expression via interacting with Per proteins in SCN. And We examined whether TTF-1 expressed in PACAP containing RGC and whether PACAP regulated by TTF-1 under light exposed condition at the late subjective night (CT22). Single fluorescence in situ hybridization (FISH) study showed that TTF-1 is expressed in the subset of RGC and double-FISH revealed that TTF-1 is exclusively coexpressed in PACAP producing in both superior and inferior region of RGC. Under light exposed condition at the late subjective night, TTF-1 contents and mRNA level in RGC were decreased. On the other hand, PACAP was increased. In vivo delivery of TTF-1 siRNA was administrated by intraoculary before the adaption of constant darkness (DD). After DD condition, TTF-1 and PACAP levels in retina were simultaneously blocked in TTF-1 siRNA treated animals under light exposed at the late subjective night (CT22). In addition, during the experiment, mRNA expression of Per1 gene was decreased in the SCN. These results demonstrate that TTF-1 regulate PACAP gene expression in the rat intrinsically photosensitive retina ganglion cells (ipRGC). Moreover, TTF-1 is able to alter the clock molecular in SCN via RHT under light exposed condition at the late subjective night.

최근 생체의 항상성조절과 뇌에서 합성되는 angiotensin peptide 의 관계에 대한 보고가 증가하고 있다. 그러나, 어떻게 gene expression 이 조절되는지는 알려져 있지 않다. 최근 본 연구자는 a homeodomain-containing transcription factor, TTF-1이 뇌의 시상하부 지 ...

최근 생체의 항상성조절과 뇌에서 합성되는 angiotensin peptide 의 관계에 대한 보고가 증가하고 있다. 그러나, 어떻게 gene expression 이 조절되는지는 알려져 있지 않다. 최근 본 연구자는 a homeodomain-containing transcription factor, TTF-1이 뇌의 시상하부 지역에서뿐만 아니라, 시상하부 이외 지역인 subfornical organ 에서 발현을 in situ hybridization 을 통해 확인하였다. 특히, subfornical organ 지역은 수분 항상성을 조절하는 주요한 신경호르몬인 angiotensinogen이 합성되며 RNase protection assay 실험결과 TTF-1과 gene expression pattern 이 유사함을 발견하였다. 그래서, 흰쥐 뇌에서 TTF-1과 angiotensinogen 의 gene expression을 생체 수분 항상성과 연관시켜 실험을 수행하였고 다음으로 이러한 항상성 조절 기작인 일주기성과 연관시켜 연구를 수행하였다. 생체 시간 조절 유전자로 잘 알려진 Period 단백질과 TTF-1의 관계를 mammalian two hybrid assay 와 Fluorescence resonance energy transfer (FRET)를 이용해서 확인하였다. 마지막으로 생체 시계 조절에 있어 중요한 요소인 빛에 의한 일주기 조절과 TTF-1의 관계를 실험하는 것으로 본 연구를 수행하였다.

본 연구자는 호메오 도메인을 포함하는 전사조절인자인 TTF-1에 의한 angiotensinogen-angiotensin precursor-의 합성 및 조절장소 subfornical organ에서의 조절을 밝히고 나아가서 구갈성 조절과 일주기성 관계를 확인하였다. 먼저, water-deprivation 상태에서는 TTF- ...

본 연구자는 호메오 도메인을 포함하는 전사조절인자인 TTF-1에 의한 angiotensinogen-angiotensin precursor-의 합성 및 조절장소 subfornical organ에서의 조절을 밝히고 나아가서 구갈성 조절과 일주기성 관계를 확인하였다. 먼저, water-deprivation 상태에서는 TTF-1과 angiotensinogen (AoGen) 의 발현이 증가하였다. 또, AoGen 의 promoter 부위에는 TTF-1의 binding motif 가 있음을 확인하였고, promoter assay를 수행한 결과 강한 promoter activation 효과가 있었다. 그리고, 뇌에서 TTF-1의 합성을 억제하자 흰쥐의 물섭취량이 줄어 들었을 뿐만 아니라, 소변의 양은 증가하였다. 이러한 결과는 TTF-1이 AoGen 합성을 조절하여 생체의 수분 항상성을 조절함을 보여준다. 그리고, 이러한 수분 항상성은 일주기성을 가지며, 생체시계부위로 알려진 시상하부 지역의 SCN과 연관성을 가짐을 확인하였다. 먼저, circadian oscillator로 잘 알려진 Period 단백질과 TTF-1의 관계를 mammalian two hybrid assay 와 Fluorescence resonance energy transfer (FRET)를 이용해서 두 분자가 서로 결합함을 확인하였다. 이것은 TTF-1은 SCN에서 period 단백질과 결합을 통하여 AoGen의 일주기성을 조절함을 의미한다. 결과적으로 TTF-1은 흰쥐 뇌에서 수분 항상성 조절의 중요인자인 AoGen의 합성을 조절하고, 이것은 시간조절 유전자와의 결합에 의해 일주기적 패턴을 보인다.